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Peroxydase, Travail Pratique. Détermination du mécanisme de catalyse


Les peroxydases sont des enzymes qui catalyse l'oxydation de molécules donneurs de protons H+ (comme les composés phénoliques des plantes) en présence du peroxyde d'hydrogène (eau oxygénée, H2O2) qui sera réduit en molécules d'eau (H2O2).

L'étude de la cinétique d'une peroxydase (objet du travail pratique, TP) permet de déterminer le mécanisme de catalyse de cette réaction d'oxydoréduction complexe.
La deuxième partie du TP sera consacrée à l'étude de la structure 3D de la peroxydase du raifort .


Liens utiles: Vidéo test d'activité de la peroxydase -- Intérrogation (début TP)--Compte rendu TP peroxydases --

Partie 1. Détermination du mécanisme de catalyse des peroxydases et analyse des isoperoxydases par électrophorèse

1. INTRODUCTION GENERALE.
Les peroxydases.
Principaux types de mécanismes de catalyse des réactions enzymatiques.
Technique d'électrophorèse.

2. MATERIEL ET METHODES.
- Culture des plantes
- Préparation du matériel végétal.
- Extraction des peroxydases.
- Fractionnement par le sulfate d'ammonium.
- Chromatographie d'exclusion sur Séphadex G 100.
- Dosage de l'activité enzymatique.

3. DETERMINATION DU MECANISME DE CATALYSE DES PEROXYDASES.
Cinétiques en fonction du gaiacol.
Cinétique en fonction du peroxyde d'hydrogène.

4. SEPARATION DES ISOENZYMES DES PEROXYDASES.
- Préparation des gels de polyacrylamide.
- Electrophorèse.
- Révélation des isoenzymes.

5. RESULTATS ET DISCUSSION.


1. Introduction générale


Les peroxydases.

Les peroxydases sont des oxydoréductases qui catalysent l'oxydation d'un substrat (donneur de protons) en presence du peroxyde d'hydrogène (H2O2). La réaction globale est du type :

2 AH2 + H2O2 --------> 2 H2O + 2 AH.

Les radicaux libres formés (AH.) sont très réactifs et peuvent aboutir à la formation de polymères :
2 AH. A + AH2 (ou AH-AH)

Peroxydase. Gaiacol et tétragaiacol
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Peroxydase, TP. Cinétique - Mécanisme catalyse