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ADN. Protocole de purification et analyse par électrophorèse
الحمض النووي الريبوزي ناقص الأكسيجين. تنقية و تحليل بالكهرتهجير


L'extraction et purification de l'acide désoxyribonucléique (ADN, DNA, الحمض النووي الريبوزي ناقص الأكسيجين) fait appel à l'application d'un protocole utilisant un milieu basique, des concentrations élevées en sel (comme NaCl), EDTA et des détergents.
Sur cette même page: أهمية منظم الاستخلاص (Importance du tampon d'extraction)  -- Traitements post-purification -- Vidéos du Laboratoire --

EXTRACTION DE L'ADN. ETAPES


Elle nécessite 3 étapes importantes, dont 1) une action physique, consistant à détruire les structures cellulaires (paroi cellulaire, en particulier) par broyage mécanique, réalisé souvant en présence de l'azote liquide, 2) une action chimique (lyse chimique) tendant à solubiliser les composantes biochimiques du tissu et 3) Une purification (isolation) de l'ADN des autres molécules biologiques comme les protéines, les polysaccharides et les composés phénoliques (séparation par affinité aux phases), précipitation de l'ADN par l'alcool (isopropanol) et Lavage de l'ADN par l'alcool (éthanol 70%)

Purification de l'ADN
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Important: l'efficacité d'un protocole d'extraction et de purification de l'ADN dépend de deux actions principales:

- Déprotéinisation et élimination d'autres impuretés (pour les plantes: sucres, phénols,..)
- Maintenir l'ADN dans un état non dénaturé (hydrolysé par des DNases)

Comme il est réalisé dans les séances des travaux pratiques (TP) du cinquième semestre (S5) de la filière licence science de la vie de la Faculté des Sciences de Marrakech (Université Cadi Ayyad, Maroc), les étudiants font l'extraction et la purification de l'ADN à partir de 4 espèces de plantes (chou-fleur, chou, courgette et courge rouge).

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