Biochimie, biotechnologies

دراسة السكريات Etude des glucides
SUCRES. ASPECT QUALITATIF
Les glucides (sucres) sont identifiables en TP S3 par des réactions caractéristiques colorée (Molish, Iode, Fehling, Barfoed, Seliwanoff, Bial). L'amidon (amylose + amylopectine) réagit avec l'iode et peut être mis en évidence.

Indicateur
Télécharger Plycopié TP Biochimie structurale 2018-19

Passer un contrôle noté sur les glucides (théorie + pratique)
Biochimie. Contrôle, qcm

Pour savoir si un aliment contient des glucides simples ou de l'amidon (amylose + amylopectine), un sucre complexe, le test de molish permet, tout d'abord, la mise en évidence d'un sucre (et pas autre chose). Le test à l'iode permet de déterminer si le glucide est de l'amidon et le processus d'identification continue selon la clé suivante où la propriété des sucres à former du furfural est exploitée:

Liens sur cette même page:

1. إختبار موليش (Test de Molish
2. اختبار اليود (Test à l'iode) للكشف عن النشا (Amidon) و الكليكوجين (Glycogène)
3. اختبار فيهلينغ (Test à la liqueur de Fehling) للكشف عن السكريات المختزلة  (Sucres réducteurs)
4. اختبار بارفود (Test de Barfoed) للتمييز بين السكريات الأحادية والسكريات الثنائية المختزلة
5. اختبار سيليفانوف (Test de Seliwanoff)
6. اختبار بيال (Test de Bial) للكشف عن السكريات الخماسية


نتطرق هنا للاختبارات المرتكزة على قدرة السكريات الاختزالية و تكوينها لمركبات الفورفورال (Furfural). تعتمد الدراسة على الرسم التالي.

Glucides (sucres). Clef


VIDEOS DU TP:
VIDEO Fr:
Voir la vidéo en Arabe

1. إختبار موليش (Test de Molish) للكشف عن السكريات

الغرض من الاختبار (But du test)
التعرف على مادة سكرية (كربوهيدراتية) وتمييزها عن الدهنيات والبروتينات. و هو اختبار عام لجميع السكريات ) كما يمكن أن يعطي إيجابية مع البروتينات السكرية). سلبية تفاعل موليش تدل على عدم وجود سكريات.
Le but du test est la mise en évidence de la présence de sucres parmi d'autres composés (lipides, protéines, ..). C'est une réaction générale à tous les sucres (oses ou osides).
أساس الاختبار(Principe du test)

في وسط حمضي مركز و تحت حرارة عالية، يتفاعل حمض الكبريت المركز (Acide sulfurique concentré) مع السكر الخماسي (Pentose) والسكر السداسي (Hexose) ويزيل بعض جزيئات الماء، إذ ينتج الفورفورال (Furfural) من السكر الخماسي وهيدروكسي ميثيل فورفورال (Hydroxyméthylfurfural) من السكر السداسي (أنظر الرسم التالي). ويمكن لكل منهما أن يتفاعل مع الفا نافتول حيث يتكون مركب أحمر بنفسجي يظهر كحلقة بين سطحي الانفصال

En milieu acide concentré et à chaud, les oses se transforment en Furfural (pour les pentoses) et Hydroxyméthylfurfural (pour les hexoses) par cyclisation et déshydratation (voir figure ci-dessous). Ces dérivés ont la propriété de réagir avec les phénols comme alpha-naphtol pour donner des colorations caractéristiques. Dans le cas d'une réaction positive avec l'alpha-naphtol, un anneau rouge violacé apparaît à l'interface acide sulfurique-solution du sucre.

Sucres. Molish

كاشف الإختبار: كاشف موليش يتكون من 2 غرام من ألفا نفتول (alpha-naphtol) محلول في 100 مل إيتانول.

Réactif de Molish (2 g alpha-naphtol + 100 ml Ethanol)


طريقة العمل (Mode opératoire)
- قم بتحضير 4 أنابيب و ضع فيها 2 مل من الكليكوز(1%) أو الفريكتوز(1%) أو السكروز(1%) أو الماء المقطر(شاهد)، فقط.
- أضف قطرتين من محلول كاشف موليش إلى كل الأنابيب ثم حركها لخلط المحتويات.
- أضف بحذر حوالي 1 مل من حمض الكبريت المركزعلى حافة الأنبوب بحيث تتكون طبقتان.  لاحظ اللون البنفسجي الموجود بين الطبقتين بشكل حلقة.
النتائج: إيجابية موليش (وجود سكريات) تظهرعلى شكل حلقة بنفسجية بين طبقتي حمض الكبريت والمحلول السكري.


- Préparer 4 tubes à essai et ajouter 2 ml de sucre 1% (glucose, fructose, saccharose) dans les 3 premiers tubes et 2 ml d'eau distillée dans le dernier tube (témoin).
- Ajouter à chaque tube 2 gouttes de réactif de Molish et agiter les tubes pour mélanger les contenus.
- Couler doucement le long de la paroi de chaque tube 2 ml de H2SO4 concentré.
- Observer et noter la coloration obtenue. La réaction de Molish est positive (présence de sucres) s'il y a apparition d'un anneau rouge-violacé dans l'interface acide sulfurique-solution de sucre (voir photo).
sucres (glucides). Molish


2. اختباراليود (Test à l'iode) للكشف عن النشا (Amidon) و الكليكوجين (Glycogène)

أساس الاختبار (Principe du test)

تعطي السكريات العديدة (Polysaccharides) مع اليود معقد ملون. يعطي النشا (Amidon) لوناً أزرقا مع اليود، بينما يتكون لون بني محمرمع الكليكوجين (Glycogène).

Le lugol ou l'eau iodée (I3-) se fixe sur les chaînes polysaccharidiques pour donner des complexes colorés. La réaction du lugol avec le glycogène donne une coloration brune alors qu'on obtient une coloration bleue-noir avec l'amidon.
L'hydrolyse enzymatique de l'amidon en unités de maltose et glucose se produisant dans le système digestif, peut être évaluée par la disparition progressive de la couleur bleue due à l'amidon non hydrolysé (TP au lycée sur les aliments et nutriments ). Les aliments dont l'amidon est riche en amylopectine, sont rapidement hydrolysés par les amylases et donnent un index glycémique élevé!

- Lugol ou solution d'iode (mélanger 1g d'iode avec 2 g d'Iodure de potassium dans 100 ml d'eau).
- Sucres : Solutions de sucre à 1% dans l'eau correspondant au glucose, amidon et glycogène.
- HCl 1N.

المواد(Matériaux)
- محلول اليود: يضاف 1 غ من اليود و 2 غ من يود البوتاسيوم إلى 100 مل من الماء المقطر.
- السكريات: محاليل %1  في الماء من الكليكوز، النشا و الكليكوجين.
- حمض HCl 1N.

طريقة العمل (Mode opératoire)
- قم بتحضير 4 أنابيب و ضع فيها 2 مل من سكر الكليكوز ب 1% (أنبوب 1) و النشا (أنبوب 2) و الكليكوجين (أنبوب 3). ضع 2 من الماء المقطر(شاهد) في الأنبوب الرابع (4).
- أضف 1 مل من حمض HCl 1N لكل أنبوب.
- أضف قطرتين من محلول اليود لكل أنبوب.
- لاحظ تغيرلون كل أنبوب النتائج: إيجابية اليود (وجود سكريات عديدة) تظهراللون الأزرق مع النشا، بينما يكون اللون بني محمرمع الكليكوجين.

- Préparer 4 tubes à essai et y mettre 2 ml d'une solution de sucre à 1% correspondant au glucose (tube 1), amidon (tube 2), glycogène (tube 3).
- Mettre 2 ml d'eau distillée dans le quatrième tube.
- Ajouter 1 ml d'HCl 1N à chaque tube.
- Ajouter 1 à 2 gouttes du lugol dilué.
- Observer et noter les colorations obtenues.
Réaction positive: l'amidon (polysaccharide) donne une couleur bleue. Le glycogène (polysaccharide) présente une couleur brun-rouge.

Amidon. Test iode


3. اختبار فيهلينغ (Test à la liqueur de Fehling) للكشف عن السكريات المختزلة  Sucres réducteurs

أساس الاختبار (Principe du test)

في وسط قاعدي و مع التسخين، تتأكسد السكريات الأحادية (و السكريات العديدة، في بعض الحالات) و تقوم في نفس الوقت باختزال عناصر كيميائية أخرى. تعود هذه الخاصية لوجود وظيفة هيمي أسيتال حرة، يحملها السكر. تعطي السكريات المختزلة (أو المرجعة) مع كاشف فيهلينغ راسب أحمر آجري من أكسيد النحاسي.

En milieu alcalin et à chaud, les oses et dans certaines conditions les polyholosides peuvent s'oxyder et en même temps réduire des substances telles que les sels métalliques. On parle alors de pouvoir réducteur des sucres. Cette propriété, qui est due à la présence de fonction hémi-acétalique libre. Celle ci peut être mise en évidence grâce au réactif de Fehling qui est une solution alcaline d'ions cuivreux de coloration bleue (les ions Cu+2 sont maintenus en solution grâce au double tartrate de Na+ et K+).

Si la réaction est positive, on obtient un précipité rouge brique dont la quantité est proportionnelle à celle du sucre réducteur présent.

المواد (Matériaux)

- محلول فيهلينغ A: يحل 35 غ من CuSO4.5H2O + 5 مل من H2SO4 + الماء ليكمل الحجم إلى 1000 مل.

- محلول فيهلينغ B: يحل 150 غ من طرطرات الصوديوم والبوتاسيوم زئد 300 مل من NaOH (10%) + الماء ليكمل الحجم إلى 1000 مل.

- كاشف فيهلينغ: يمزج حجم متساو من محلول فيهلينغ A ومحلول فيهلينغ B, هذا الكاشف يحضر مباشرة قبل البدء بالعمل.

- السكريات: محاليل %1  في الماء من الكليكوز، الفريكتوز، ريبوز، سكروز و مالتوز.

- Liqueur de Fehling : La liqueur de Fehling est obtenu en mélangeant volume à volume, deux solutions A et B dont la composition est la suivante :
- Solution A : 35 g CuSO4.5H2O + 5 ml H2SO4 concentré + H2O (compléter à 1L).
- Solution B: 150 g tartrate de K et Na + 300 ml NaOH 10% + H2O, compléter à 1000 ml
- Sucres : Solutions de Glucose, fructose, ribose, saccharose et maltose, toutes à 1%

طريقة العمل (Mode opératoire)

- قم بتحضير 6 أنابيب و ضع فيها 1 مل من محلول  A و 1 :مل من محلول B لكاشف فيهلينغ.

-أضف 2 مل من سكر الكليكوز ب 1% (أنبوب 1) و الريبوز (أنبوب 2) و الفريكتوز (أنبوب 3)، و السكروز (أنبوب 4) و المالتوزز (أنبوب 5). ضع 2 من الماء المقطر(شاهد) في الأنبوب السادس (6). قم بتحريك جميع الأنابيب لخلط المحتويات.

- قم بتسخين الأنابيب في حمام مائي غالٍ لمدة 3 دقائق.

- لاحظ تغيرلون كل أنبوب

النتائج: إيجابية كاشف فيهلينغ (وجود سكريات مختزلة) تظهر بتشكل راسب أحمر آجري.

- Préparer 6 tubes à essai  mettez dans chaque tube 1 ml de la solution A puis 1 ml de la solution B. (A+B forment la liqueur de Fehling).
- Ajoutez 2 ml de chaque solution de sucre correspondant au glucose (tube 1), ribose (tube 2), fructose (tube 3), saccharose (tube 4) et maltose (tube 5). Ajouter au sixième 2 ml d'eau distillée.
- Agiter pour bien mélanger le contenu des tubes
- Porter les tubes à ébullition pendant 3 min
- Observer et noter le résultat obtenu.
Réaction positive: Apparition d'un précipité rouge brique dont la quantité est proportionnelle à celle du sucre réducteur présent.


facebook google plus Twitter Linkedin

Livre 'Sciences de la vie. Biochimie', Baaziz, 2012 (+ CD): Ouvrage facilitant la transition Secondaire-Supérieur (Ar, Fr) avec DVD + QCMs, Exercices

sucres

360 pages, 2018, ISBN : 978-9920-35-345-8 + DVD mis à jour + Assistance.

4. اختبار بارفود (Test de Barfoed) للتمييز بين السكريات الأحادية والسكريات الثنائية المختزلة

أساس الاختبار (Principe du test)
يطبق اختبار بارفود للتمييز بين السكريات الأحادية والسكريات الثنائية, وذلك من خلال سرعة تشكل راسب أحمر آجري (أكسيد النحاسي), حيث تعطي السكريات الأحادية هذا الاختبار خلال 5 دقائق، في حين تحتاج السكريات الثنائية إلى 7-12 دقيقة. تتغير كمية الراسب الأحمر تناسبيا مع كمية السكر المختزل,

Le test de Barfoed est utilsé pour distinguer les monosaccharides des disaccharides parmi des sucres réducteurs. En présence d'un sucre réducteur et à chaud, il y'a formation d'oxyde cuivreux rouge brique insoluble. La réaction est plus rapide quand le sucre réducteur est un ose (5 minutes de chauffage). Elle est plus lente lorsqu'il s'agit d'un disaccharide réducteur (7-12 minutes de chauffage). En effet, par hydrolyse en milieu acide, les oligosaccharides libèrent des unités monosaccharides et finissent par donner un résultat positif, mais après un temps supérieur à 5 min. Si la réaction est positive, on obtient un précipité rouge brique dont la quantité est proportionnelle a celle du sucre réducteur présent.


المواد (Matériaux)
- كاشف بارفود: يحل 13.3 غ من أسيتات النحاس إلى 200 مل من الماء، ويضاف إليها 8مل من حمض الخل الثلجي - لون أزرق.
- السكريات: محاليل %1  في الماء من الكليكوز، المالتوز و السكروز.
- Réactif de Barfoed : 13,3 g d'acétate de cuivre dans 200 ml d'eau distillée et 8 ml d'acide acétique glacial (coloration bleue).
-Sucres: Solutions à 1% (dans l’eau) de Glucose, maltose et saccharose

طريقة العمل (Mode opératoire) - قم بتحضير 4 أنابيب و ضع فيها 1 مل من محلول كاشف بارفود.

- أضف 1 مل من سكر الكليكوز (أنبوب 1) و المالتوز (أنبوب 2) و السكروز (أنبوب 3). ضع 1 من الماء المقطر(شاهد) في الأنبوب الرابع. قم بتحريك جميع الأنابيب لخلط المحتويات.

- قم بتسخين الأنابيب في حمام مائي غالٍ و لاحظ تغير لون كل أنبوب مع احتساب الوقت. قف عن التسخين بالنسبة للأنابيب التي أظهرت لونا أحمرا آجري و تابع التسخين بالنسبة للأنابيب الأخرى.  

إيجابية التفاعل: إيجابية كاشف بارفود (وجود سكريات مختزلة أحادية أو ثنائية) تتمثل في تكون راسب أحمر آجري في ظرف 5 دقائق في حالة السكريات الأحادية أو 7-12 دقيقة، بالنسبة للسكريات الثنائية.

Préparer 4 tubes à essai et y mettre 1 ml de réactif de Barfoed.

- Ajoutez aux tubes les solutions de sucres correspondant au glucose (tube 1), maltose (tube 2) et saccharose (tube 3). Ajouter 2 ml d'eau distillée dans le quatrième tube. Agiter les tubes pour bien mélanger leurs contenus.

- Porter les tubes à ébullition et noter le temps de chauffage. Arrêter de chauffer les tubes ayant montré un précipité rouge brique. Continuer à chaffer les autres tubes.

Réaction positive: pour les oses (monosaccharides) réducteurs, il y a apparition d'un précipité rouge brique après chaffage pendant 5 minutes. Pour les disccharides réducteurs, le temps de chauffage nécessaire est 7-12 minutes.


5. إختبار سيليفانوف (Test de Seliwanoff) للكشف عن السكريات الكيتونية

الغرض من الاختبار(But du test)

التمييز بين السكريات الأحادية الالدهيدية (مثل الكليكوز) والسكريات الأحادية الكيتونية (مثل الفريكتوز) أو على السكريات التي تعطي سكريات كيتونية بالتحلل المائي مثل السكروز.  يعطي الاختبار لونا مميزا بالنسبة للسكريات الكيتونية (أحمر كرزي).

Le but du test de Seliwanoff est la distinction entre les cétoses (comme le fructose) et les aldoses (comme le glucose), y compris les glucides contenant donnant des cétoses par hydrolyse. Le test de Seliwanoff donne une coloration caractéristique des cétoses (rouge cerise). 

أساس الاختبار (Principe du test):

تختلف السكريات الكيتونية عن السكريات الالدهيدية في أنها تفقد الماء بسرعة أكبر وتكون فورفورال بسهولة أكثر. ويتكثف الفورفورال مع الريزوسينول ليتكونمعقد أحمراللون (أحمر كرزي ، rouge cerise)

En présence d'acide chlorhydrique concentré et à chaud les cétoses se déshydratent rapidement pour donner le 5-hydroxyméthylfurfural qui se condense avec le résorcinol pour former un composé rouge cerise.

Selivanoff reaction

المواد (Matériaux)

كاشف الاختبار: يتكون كاشف سيليفانوف من 2 غرام من الريزورسينول (Résorcinol) و 33 مل من حمض الكلور هيدريك (Acide chlorhydrique, HCl) المركز، زائد 100 مل من الماء المقطر .

- السكريات: محاليل %1 في الماء من الكليكوز، المالتوز و السكروز.
- Réactif de sellivanoff: 2 g résorcinol + 33 ml HCl concentré + 100 ml H2O.
- Sucres: Solutions à 1% (dans l'eau) de Fructose, mannose et saccharose.

طريقة العمل (Mode opératoire):

- قم بتحضير 4 أنابيب و ضع فيها 2 مل من الفريكتوز (أنبوب رقم 1)، 2 مل من المانوز (أنبوب رقم 2)،  2 مل من السكاروز (أنبوب رقم 3) و 2 مل من الماء المقطر(أنبوب رقم 4، شاهد).

- أضف لكل أنبوب 2 مل من كاشف سيليفانوف.
- أضف لكل أنبوب 2 مل من HCl المركز.
- قم بتسخين الأنابيب لمدة 5 دقائق في ماء يغلي ثم اترك الأنابيب تبرد و لاحظ لون كل أنبوب.

- إيجابية التفاعل:
إيجابية اختبار سيليفانوف تتمثل في ظهور لون أحمركرزي عند سكريات الكيتوز.

- Préparer 4 tubes et y déposer 2 ml de solution de sucre à 1% correspondant fructose  (tube 1),  mannose (tube 2), saccharose (tube 3). Mettre 2 ml d’eau distillée dans un quatrième tube (tube 4, témoin).

- Ajouter à chaque tube 2 ml du réactif de Seliwanoff Ajouter à chaque tube 1 ml d'HCl concentré

- Chauffer les tubes pendant 5 min au bain-marie bouillant et laisser refroidir. Observer et noter les colorations obtenues.

Réaction positive: apparition d'une couleur rouge cerise chez les cétoses.


6. اختبار بيال (Test de Bial) للكشف عن السكريات الخماسية

أساس الاختبار (Principe du test)

تعطي السكريات الخماسية مع كاشف بيال لوناً أخضر مزرق، في حين تعطي السكريات السداسية مع كاشف بيال لوناً بنياً مصفراً.
Cette réaction est spécifique des pentoses. En milieu HCl concentré et en présence d';ions Fe+3, les pentoses se condensent avec l'orcinol pour former un composé de coloration verte.

المواد (Matériaux)

- كاشف بيال: 0,2 غ من الأورسينول في 100 مل من حمض الكلوريدريديك المركز، ويضاف 5 قطرات من محلول كلوريد الحديد (FeCl3) 10%.

- السكريات: محاليل %1  في الماء من الكليكوزو الريبوز.

- Réactif de Bial (0,2 g d'orcinol + 100 ml HCl concentré + 5 gouttes FeCl3 à 10%

- Sucres: 2 solutions à 1% dans l'eau de glucose et de ribose.

طريقة العمل (Mode opératoire)

- قم بتحضير 3 أنابيب و ضع فيها 1 مل من محلول بيال.

- أضف 1 مل من سكر الكليكوز (أنبوب 1) و الريبوز (أنبوب 2). ضع 1 من الماء المقطر(شاهد) في الأنبوب الثالث (3). قم بتحريك جميع الأنابيب لخلط المحتويات.

- قم بتسخين الأنابيب في حمام مائي غالٍ و لاحظ تغيرلون كل أنبوب

إيجابية كاشف بيال: ظهور لون أخضر يرمز لوجود سكريات خماسية.

- Préparer 3 tubes à essai: mettez dans chaque tube 1 ml de réactif de Bial (sous hotte). - Ajouter dans les tubes 1 ml de la solution de sucre correspondant au glucose (tube 1) et ribose (tube 2). Dans un troisième tube, ajouter 1 ml d'eau distillée.

- Porter les tubes à ébullition et noter la coloration de chaque tube

- Réaction est positive: apparition d'une couleur verte bleutée (Vert bouteille) pour les pentoses. Dans le des hexose, la couleur est brune jaunâtre.


Sucres. Reactions de Seli vanof et Bial
VIDEO Ar:

LIENS UTILES


- Identification des sucres. QCM
- QCM-glucides 1
- QCM Glucides 2
- QCM lipides-Protéines-Membrane
- sucres monosaccharides (ose)
- Sucres disaccharides
- Sucres polysaccharides
- Visualisation 3D des Glucides (Sucres)
- تقييم السكريات المختزلة المحضرة من البطاطس
- Dosage des sucres réducteurs préparés à partir de la pomme de terre
- تقييم النشا الكلي و الأميلوز و الأميلوبيكتين بواسطة قياس الامتصاص الطيفي Dosage par spectrophotometrie de l'amidon total, l'amylose et l'amylopectine


EN RAPPORT AVEC BIOCHIMIE, BIOTECHNOLOGIES

Adresse

Faculty of Sciences, Cadi Ayyad University
Marrakech, 40000, Morocco

FORMULAIRE POUR CONTACT

Email: baaziz@uca.ac.ma
Phone: 212524434649 (post 513)
Fax: 212524434669
About takween.com

Glucides (Sucres سكريات). TP S3