TECHIQUES
D'ANALYSE DU PROTEOME.
INTRODUCTION A LA PROTEOMIQUE
TRAVAUX DIRIGES
L'isolement et les analyses préliminaire d'une enzyme E ont révélés sa présence sous deux formes E1 et E2 possédant respectivement les pHi 6,25 et 6,35.
Les masses moléculaires des monomères de types A, B, C et D sont 60000, 30000, 20000 et 10000, respectivement. Seuls les monomères de types B et C sont reliés par des ponts dissulfures. Les valeurs des pHi de chaque monomère sont données dans le tableau suivant :
A1
B1
C1
D1
6,3
6,3
6,1
6,3
B2
C2
D2
6,5
6,3
6,1
6,3
L'association
des deux monomères de types B et C possède un pHi de 6,2
Trois électrophorèses bidimensionnelles (E2D) ont été
réalisées sur l'enzyme E :
E2D
N°1: Première dimension : isoélectrofocalisation
non dénaturante
Deuxième dimension : Electrophorèse en présence de
SDS et de ß-mercaptoéthanol
E2D N°2 : Première dimension : isoélectrofocalisation
en présence d'urée 9M
Deuxième dimension : Electrophorèse en présence de
SDS et de
ß-mercaptoéthanol
E2D N°3 : Première dimension : isoélectrofocalisation
en présence d'urée 9M et
de ß-mercaptoéthanol
Deuxième dimension : Electrophorèse en présence de
SDS et de ß-mercaptoéthanol
Etablir les électrophorégrammes correspondant pour chacune des 3 éléctrophorèses bidimensionnelles. Annoter les polarités et les composants de chaque bande ou tache. Justifier vos réponses
