Takween. Sciences de la vie,
Biochimie
Life Sciences, Biochemistry
علوم الحياة، بيوكيمياء
Cours -- TD -- TP
Transition Secondaire-Supérieur
إنتقال ثانوي - عالي
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Transition Secondaire-Supérieur
إنتقال ثانوي - عالي
A partir du saccharose, l'invertase (إنزيم إنفيرتيز) libère du glucose (aldohexose, dextrose) et du fructose (cétohexose levulose). Le mélange est un sucre inverti lévogyre. L'activité de l'enzyme peut être évaluée par le dosage des sucres réducteurs par le 3,5-DNS. -- Voir Vidéo du Travail Pratique
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INVERTASE. QCM SERIE 1
QUESTION 1. Choisir l'information correcte concernant la réaction enzymatique catalysée par l'invertase - cocher la réponse juste-Détail de la réponse
(!L'invertase est spécifique du saccharose.)(!La réaction enzymatique génère un mélange de sucres dextrogyre à partir du saccharose.)(La réaction catalysée par l'invertase libère du glucose -aldohexose, dextrose- et du fructose -cétohexose levulose-.)(!L'invertase libère un mélange de sucres dont la saveur sucrée est proche de celle du saccharose.)
QUESTION 2. Choisir l'information correcte relative
à l'action de l'invertase extraite de sources différente et
dont les produits de la réaction enzymatique sont analysés
par chromatographie sur couche mince -figure ci dessous-cocher la réponse
juste-
(!L'invertase 1 -source: Saccharomyces cerevisiae-
ne montre pas assez d'affinité pour le saccharose.)(!L'invertase
2 -source: Cryptococcus laurentii- ne pouvant intervertir tout le
saccharose, présente moins d'interaction avec ce substrat.)(L'invertase
1 pouvant intervertir tout le saccharose, présente plus d'interaction
avec ce substrat.)(!L'invertase 2 est plus purifiée
que l'invertase 1.)
INVERTASE. QCM SERIE 2
QUESTION 3. Choisir l'information correcte relative à l'invertase-cocher la réponse juste- Détail de la réponse (C'est une ß-fructofuranosidase)(!C'est une enzyme d'isomérisation)(!C'est une enzyme des parois cellulaires.)(!C'est une enzyme débranchante.)
QUESTION
4. Choisir l'information incorrecte
relative à l'invertase: -cocher la réponse juste- Détail
de la réponse
(!Enzyme générant des glucides dont la saveur sucrée dépasse celle du saccharose -sucre de table-.)(Enzyme à structure subunitaire et non glycosylée ou faiblement glycosylée.)(!Enzyme pouvant reconnaître des tri et tétrasaccharides.)(!Le sucralose -disaccharide artificiel- serait pour l'invertase un inhibiteur compétitif vis à vis du saccharose.)(!Le
cuivre, se fixant sur les groupes sulfhydriles des systéines et méthionines
de l'apoenzyme, serait pour l'invertase un inhibiteur non compétitif.)
QUESTION 5. Préciser la nature du Triton X-100 et son rôle dans l'extraction de l'invertase de la levure boulangère -cocher la réponse juste- Détail de la réponse (!Détergent anionique qui détruit les structures lipidiques des membranes conduisant à l'extraction de l'invertase.)(!Composé à caractère hydrophobe réagissant avec les structures hydrophobes de l'invertase l'amenant à être facilement extraite.)(!Composé ayant une partie hydrophile et une partie hydrophobe dont lrôle est la protection de l'invertase.)(Détergent non ionique détruisant les structures lipidiques des membranes pour extraire l'invertase.)
QUESTION 6. Choisir l'information correcte relative à l'invertase -cocher la réponse juste- Détail de la réponse (!Le 2-mercaptoétahnol utilisé dans l'extraction de l'invertase a pour rôle de dissocier la paroi cellulaire.)(La réaction enzymatique catalysée par l'invertase est arrêtée par l'apport d'une solution basique -solution contenant aussi le DNS qui oxyde les sucres réducteurs-.)(!Le pH optimum de l'ivertase de la levure boulangère est de l'orde de pH 7,0.)(!La formation d'un sucre inverti composé de glucose de fructose ne peut être obtenu que par l'action d'une invertase.)
QUESTION 7. Choisir l'information correcte concernant le test de l'activité de l'invertase par dosage des sucres réducteurs utilisant le DNS -cocher la réponse juste- Détail de la réponse
(Le DNS sous sa forme habituelle -de couleur jaune-, est considéré comme oxydant pour les sucres réducteurs qui vont le réduire.)(!L'augmentation de l'absorbance à 540 nm -couleur rouge orange après traitement par DNS des produits de la réaction enzymatique catalysée par l'invertase- est un signe de d'oxydation du DNS.)(!Le DNS est faiblement réduit par le saccharose.)(!L'interconversion
du fructose en glucose survenant à chaud et à pH basique,
n'intervient pas dans le test d'activité enzymatique de l'invertase
par le DNS.)
QUESTION à cases vides (invertase TP).
Pour la vérification des réponses, remplir toutes les cases, d'abord. Les réponses justes sont retenues dans les cases correspondantes. Les réponses fausses sont vidées des cases. Vous êtes noté sur le nombre de tentatives pour avoir tout juste !
Afin de sélectionner une souche de levure boulangère préservant les fructanes du blé lors de la panification, on teste deux souches de levures pour leurs activités invertase sur le saccharose et le raffinose (Gal-Gluc-Fru). Un protocole d'extraction de l'invertase est adopté et les paramètres cinétiques Km et Vmax obtenus, ainsi que le rapport Vmax/Km (efficacité catalytique), sont résumés dans la figure suivante. Remplir les cases vides par des mots ou nombres convenables (écriture en MAJUSCULES sans espace, sinon, copier et coller les mots proposés.
1/ L'invertase est une enzyme qui libère toujours du: FRUCTOSE (choix: GLUCOSE, FRUCTOSE, ALDOSE, CETOSE, GALACTOSE).
2/ Je prépare les deux enzymes invertase à partir des 2 souches
de levure en suivant l'ordre logique: 1-3-5-7-8 (choix: 1-2-5-7-8,
1-3-5-7-8, 1-3-4-7-8, 1-3-6-7-8, 1-2-6-7-8).
3/ Le tampon d'extraction de concentration 100 mM, étant préparé
à partir d'une solution mère 0,625 M. Pour en préparer
500 mL, il faut prélever:80 (choix: 8, 10, 20, 40, 70, 80, 100)
mL de la solution mère et compléter à 500 mL par l'eau
distillée.
4/ Le mélange réactionnel du test d'activité des deux
invertases a un volume de 3 mL, dont 0,5 mL de substrat 0,24 M. La concentration
finale du substrat dans le mélange est :40 (choix: 10, 20, 30, 40, 50, 55) mM.
5/ Par rapport à l'invertase de la souche 1 de levure, l'invertase
de la souche 2, a une affinité:INFERIEURE (choix: IDENTIQUE, SUPERIEURE,
INFERIEURE)vis à vis du raffinose.
6/ Par rapport à l'invertase de la souche 1 de levure, l'invertase
de la souche 2, a une affinité: SUPERIEURE (IDENTIQUE, SUPERIEURE,
INFERIEURE)vis à vis du saccharose.
7/ Par rapport à l'invertase de la souche 1, l'invertase la souche
2 libérera des quantités de Fructose et de lactulose (Gal
béta (1 --> 4)Fru) par substratINFERIEURES (choix: SUPERIEURES,
INFERIEURES, IDENTIQUES) à partir du raffinose
8/ Avec la levure boulangère de la souche 2, on pourrait:PROTEGER
(DETRUIRE, PROTEGER, EDIFIER, RESTRUCTURER) les fructanes de la
farine
9/ Si le prix de l'invertase est inversement proportionnel à son
efficacité catalytique sur le raffinose, le prix de l'enzyme de la
souche 2 sera2 (choix: 2, 3, 4, 6, 10) fois celui de l'invertase
de la souche 1.
10/ Si le prix de l'invertase est inversement proportionnel à son
efficacité catalytique sur le saccharose, le prix de l'enzyme de
la souche 2 seraIDENTIQUE (choix: SUPERIEUR, INFERIEUR, IDENTIQUE)
à celui de l'invertase de la souche 1
Réponse
1 (question 1). . L'INVERTASE LIBERE
LE GLUCOSE (ALDOHEXOSE, DEXTROSE) ET LE FRUCTOSE (CETOHEXOSE, LEVULOSE). LE
MELANGE EST UN SUCRE INVERTI A SAVEUR SUCREE SUPERIEURE A CELLE DU SACCHAROSE.
L'invertase ou ß-fructofuranosidase, est une glycoside hydrolase qui
hydrolyse le saccharose (سكر القصب, sucrose) en glucose et fructose
par rupture des liaisons ß fructofuranosiques.
Réponse 2
(question 2). L'INVERTASE 1 de Saccharomyces cerevisiae
POUVANT INTERVERTIR TOUT LE SACCHAROSE, PRESENTE PLUS D'INTERACTION AVEC CE
SUBSTRAT. Avec l'invertase 1 de Saccharomyces cerevisiae les produits
de la réaction ne présentent aucune trace du saccharose
Réponse 3
(question 3). La localisation de l'invertase n'est
pas limitée à la paroi cellulaire. L'invertase est une
ß-fructofuranosidase pouvant se trouver dans les parois cellulaires
et d'autres organites dont les vacuoles.
Réponse
4 (question 4). L'invertase est une enzyme
à structure subunitaire et fortement glycosylée.
Réponse 5 (question
5). Le Triton X-100 est un détergent non ionique détruisant
les structures lipidiques des membranes pour extraire l'invertase (comparaison
des détergents).
Réponse 6 (question 6). C'est la solution basique du DNS qui arrête l'activité de l'invertase. La réaction enzymatique catalysée par l'invertase est arrêtée par l'apport d'une solution basique (solution contenant aussi le DNS qui oxyde les sucres réducteurs). Le sucre inverti est un mélange équimolaire de glucose et de fructose obtenu par hydrolyse du saccharose. L'hydrolyse est réalisée soit par l'invertase, soit par un acide.
Réponse
7 (question 7). Le DNS sous sa forme habituelle (de couleur
jaune), est considéré comme oxydant pour les sucres réducteurs qui vont le réduire. La forme réduite absorbe la lumière à 540 nm.
Rappel. La préparation du DNS exige les réactifs:
1) Tartrate de sodium et de potassium : Dissoudre 45 g de tartrate de sodium et de potassium dans 75 ml de H2O.
2) Solution 3,5-DNS : Dissoudre 1,5 g de réactif DNS dans 30 mL de NaOH 2 M.
Réactif DNS : Préparez solution fraiche en mélangeant les réactifs 1) et 2) puis compléter le volume à 150 mL avec de l'eau.
VIDEO DU TP
- Invertase, Enzymologie. QCM contrôle
noté
- Aller aux
tests de l'effet de la concentration du substrat (notion de Km et Vmax) et
effets des inhibiteurs
- Aller aux généralités
sur l'invertase
- 3D Structure (JMOL) of Thermotoga maritima invertase
- Faire un Contrôle temporisé
et noté en enzymologie
- Livre 'Sciences de la vie. Protéines et Enzymes',
AR, Fr (+ DVD), Baaziz,2013, 306 pages, ISBN : 978-99-54-32-663-3 + DVD
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