Takween. Sciences de la vie, Biochimie
Life Sciences, Biochemistry
علوم الحياة، بيوكيمياء
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Les techniques biochimiques et moléculaires de détection de la diversité génétique couvrent les isoenzymes, RFLP et techniques basées sur la PCR (RAPD, AFLP, ..)
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- Electrophorèse
- Travaux dirigés
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- Isoenzymes-mutations
- Isozymes. Principe de détection
- Isozymes : loci, allèles
- Isozymes hétéromériques
- RAPD
- isoenzymes. Examen 2007
- Isoenzymes. Contrôle 2017
-Livre 'Structures et Métabolisme des Sucres', Baaziz,
2018(+ DVD, 400 QCM):
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du livre
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CONTROLE
Module 'Techniques d'analyse et biostatistiques', semestre S5
Filière 'Sciences de la vie', Université Cadi Ayyad,
Marrakech, Maroc, Cours théorique et pratique, M. Baaziz
Année universitaire 2005-2006. Durée : 40 minutes
L'étude
de la diversité génétique des espèces
fait appel à l'utilisation de marqueurs biochimiques et moléculaires
comme les isoenzymes fréquemment utilisées pour
les différents avantages qu'elles montrent.
Soit le Zymogramme suivant correspondant aux estérases (migration
dans le sens - vers +):
Interpréter le zymogramme en déterminant la nature de l'enzyme et les génotypes
des différents individus (justifiez votre réponse)
Les
marqueurs basés sur la Polymérisation en chaîne
du DNA (PCR), ont contribué largement à l'évaluation
de la diversité génétique de plusieurs espèces.
Ainsi la technique RAPD a connu un développement important
à partir de 1998.
Soit l'électrophorégramme RAPD suivant (migration dans
le sens - vers +):
Interpréter le diagramme en déterminant les origines de la variabilité
enregistrée entre les individus (justifiez votre réponse)
https://youtu.be/CNynZyPaPyc
Le
Zymogramme présente un polymorphisme enzymatique élevé
où chaque individu est caractérisé par un phénotype
électrophorétique différent. L'enzyme est résolue
en une seule zone correspondant à un seul locus.
Le nombre maximal d'isoenzymes (bandes) révélées
par individu est deux.
Sachant que le nombre maximal de bandes se trouve chez les hétérozygotes,
l'enzyme en question possède une structure monomérique.
Pour rappel le nombre maximal de bandes est égal à n
+ 1, avec n étant le nombre de sous-unités.
Conclusion : l'Enzyme est sous le contrôle d'un seul locus codant
pour une protéine de nature monomérique avec 2 allèles
(A et B). Les individus 1, 2 et 4 sont des homozygotes. Ils ont comme
génotypes respectifs BB, AA et AA. Les individus 3 et 5 sont
des hétérozygotes et ont tous comme génotype
AB.
Les origines du polymorphisme de type RAPD sont:
- Disparition par mutation (mutation ponctuelle, crossing-over, insertion,
délétion, ...) d'un ou plusieurs sites de fixation de l'amorce.
- Eloignement, par insertion, des sites de fixation de l'amorce à
une distance supérieure à 3000 pb. Il en résulte
la disparition de fragments de DNA.
- Rapprochement, par délétion, des sites de fixation
de l'amorce à une distance inférieure ou égale
à 3000 pb. Il en résulte l'apparition de fragments surnuméraires.
- Rapprochement très accusé des sites de fixation de
l'amorce ne donnant lieu qu'à de petits fragments de DNA n'apparaissant
pas sur le gel après électrophorèse.
En passant de l'individu 1 à l'individu 2 : la disparition de
la bande la plus mobile (2) peut être expliquée par :
- une insertion dans la zone correspondant au fragment le plus mobile
(2) ce qui a entraîné un allongement dépassant
3000 pb qui rend la polymérisation de cette région impossible
et donc disparition du fragment
- Une délétion accusée dans la zone correspondant
au fragment le plus mobile qui donne naissance à un autre fragment
de taille très faible sortant du gel lors de l'électrophorèse.
En passant de l'individu 1 à l'individu 3 : la diminution de
la taille du fragment le plus mobile (2) peut être expliquée
par :
- une délétion dans la zone correspondant au fragment
le plus mobile (la taille devient faible)
- une mutation dans la zone du fragment 2 donnant lieu à l'apparition
d'un nouveau site de fixation de l'amorce et dont la polymérisation
donne deux petits fragments dont un sort du gel suite à une
taille très faible.
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