Vocabulaire:
عربي | English | Français |
إمتصاصية | Absorbance, Optical density | Absorbance, Densité optique |
مطياف | Spectrophoto meter | Spectrophoto mètre |
المطياف يقيس كمية الضوء الممتصة من طرف عينة في طول موجة محددة | A spectrophotometer measures the amount of light that is absorbed by a sample at a fixed wavelength. | Le spectrophoto mètre mesure la lumière absorbée par un échantillon pour une longueur d'onde fixée. |
La sectrophotometrie exploite l'absorption des molécules dans une longueur d'onde déterminé du spectre pour identifier et évaluer la concentration de ces molécules. Elle utilise le spectrophotomètre pour atteindre ces buts.
De nombreuses molécules peuvent être dosées par spectrophotometrie, dont les protéines (dosage des protéines spectrophotométrie) et es sucres ( dosage des sucres réducteurs par DNS (absorbance à 540 nm))
يستغل القياس الطيفي امتصاص الجزيئات في طول موجي محدد من الطيف لتحديد وتقييم تركيز هذه الجزيئات. في هذا الغرض، يستخدم جهاز المطياف.
Exercice 1 (spectrophotometrie) -- Réponse 1. Quelle est la concentration de l'acide amine tyrosine sachant qu'il a une absorbance de 0,70 obtenue à une longueur d'onde (lambda) précise en utilisant une cuve de spectrophotomètre de 1 cm d'épaisseur. Le coefficient d'extinction molaire pour Lys (Epsilon) est 1 420 M-1 x cm-1). Quelle sera l'absorbance d'une solution de 0,35 mM de tyrosine?
Concentrations en hémoglobine standard (µg/ml) | Densité optique à 412 nm |
1 | 0,070 |
2 | 0,114 |
4 | 0,202 |
8 | 0,378 |
16 | 0,731 |
Exercice
3 (spectrophotometrie) -- Réponse
3.
Le nicotinamide adénine dinucléotide réduit (NADH)
est le coenzyme de nombreuses déshydrogénases.
a- Calculer l'absorbance à 340 nm et à 260 nm d'une solution
de NADH à 0,05 g/litre, placée dans une cuve dont le trajet
optique est de 1 cm. PM signifie le poids moléculaire, K signifie
le coefficient d'extinction molaire (unites : M-1 x cm-1)
PM NADH = 709 g/mol
K NADH (à 340 nm) = 6 220 M-1cm-1
K NADH (à 260 nm) = 15 400 M-1cm-1
b- Au cours d'une manipulation, lon réalise 5 ml d'un mélange
NADH/NAD+ mais on a oublié de noter les concentrations respectives
sur le flacon. Pour trouver ces valeurs, on a effectué des mesures
au spectrophotomètre avec une cuve de 1 cm de trajet optique :
DO340nm = 0,44
DO260nm = 1,31
Quelles
sont les concentrations en NADH et NAD+ dans le mélange sachant
que:
K NAD+ (à 340 nm) = 0 M-1cm-1
K NAD+ (à 260 nm) = 15 400 M-1cm-1
Réponse
à l'exercice 1 (Spectrophotometrie) Revenir à Exercice 1
- La relation entre l'absorbance ou densité optique (DO) d'une solution et sa
concentration (c) est donnée par l'equation de Beer-Lambert :DO
= Kcl, avec:
K = coefficient d'extinction molaire (unites : M-1 x cm-1)
c = concentration (unité : mol/l = M)
l = trajet optique (épaisseur de la cuve; unité : cm)
Selon les données, on aura:
0,70 = 1420 l mol-1 cm-1 x c x 1 cm
Donc: c = 5 x 10-4 M
- La DO d'une concentration en Lys égale à 0,35 mM:
Equation de Beer-Lambert: DO = Kcl
Ainsi : DO = 1420 l mol-1 cm-1 x (0,35 x 10-3M) x 1cm
DO = 0,50
Réponse
à l'exercice 2 (Spectrophotometrie) - Revenir
à Exercice 2
En exploitant la gamme-étalon, on trace la courbe (droite passant par l'origine) standard liant la DO à la concentration connue en
hémoglobine. On obtient la droite suivante:
Comme la concentration inconnue a une absorbance de 0,45. La projection de cette valeur de DO sur la droite a pour vaeur de concentration en hémoglobine (axe des abscisses) 9,5 µg/ml.
Réponse
à l'exercice 3 (Spectrophotometrie) - Revenir
à Exercice 3
a- DO (à 340 nm) = 0,438, DO (à 260 nm) = 1,086.
b- (NADH) = 7,073. 10 -5 M, (NAD+) = 1,432. 10
-5 M
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