spectrophotométrie, absorbance. Exercices
قياس امتصاصية الطيف


Vocabulaire:

عربي English Français
إمتصاصية Absorbance, Optical density Absorbance, Densité optique
مطياف Spectrophoto meter Spectrophoto mètre
المطياف يقيس كمية الضوء الممتصة من طرف عينة في طول موجة محددة A spectrophotometer measures the amount of light that is absorbed by a sample at a fixed wavelength. Le spectrophoto mètre mesure la lumière absorbée par un échantillon pour une longueur d'onde fixée.

La sectrophotometrie exploite l'absorption des molécules dans une longueur d'onde déterminé du spectre pour identifier et évaluer la concentration de ces molécules. Elle utilise le spectrophotomètre pour atteindre ces buts.
De nombreuses molécules peuvent être dosées par spectrophotometrie, dont les protéines (dosage des protéines spectrophotométrie) et es sucres ( dosage des sucres réducteurs par DNS (absorbance à 540 nm))

يستغل القياس الطيفي امتصاص الجزيئات في طول موجي محدد من الطيف لتحديد وتقييم تركيز هذه الجزيئات. في هذا الغرض، يستخدم جهاز المطياف.


Exercice 1 (spectrophotometrie) -- Réponse 1. Quelle est la concentration de l'acide amine tyrosine sachant qu'il a une absorbance de 0,70 obtenue à une longueur d'onde (lambda) précise en utilisant une cuve de spectrophotomètre de 1 cm d'épaisseur. Le coefficient d'extinction molaire pour Lys (Epsilon) est 1 420 M-1 x cm-1). Quelle sera l'absorbance d'une solution de 0,35 mM de tyrosine?


Exercice 2 (spectrophotometrie) -- Réponse 2. Pour determiner la concentration d'hémoglobine dans un echantillon de sang par
spectrophotometrie, on prépare une courbe standard d'absorbance a 412 nm de plusieurs
solutions d'hemoglobine de concentrations connues. Les resultats obtenus sont presentées dans le tableau ci-dessous. Quelle est la concentration (en µg/ml) en hemoglobine dans un échantillon d'hémoglobine préentant une DO à 412 nm égale à 0,45?
Concentrations en hémoglobine standard (µg/ml) Densité optique à 412 nm
1 0,070
2 0,114
4 0,202
8 0,378
16 0,731

Exercice 3 (spectrophotometrie) -- Réponse 3.
Le nicotinamide adénine dinucléotide réduit (NADH) est le coenzyme de nombreuses déshydrogénases.
a- Calculer l'absorbance à 340 nm et à 260 nm d'une solution de NADH à 0,05 g/litre, placée dans une cuve dont le trajet optique est de 1 cm. PM signifie le poids moléculaire, K signifie le coefficient d'extinction molaire (unites : M-1 x cm-1)
PM NADH = 709 g/mol
K NADH (à 340 nm) = 6 220 M-1cm-1
K NADH (à 260 nm) = 15 400 M-1cm-1
b- Au cours d'une manipulation, lon réalise 5 ml d'un mélange NADH/NAD+ mais on a oublié de noter les concentrations respectives sur le flacon. Pour trouver ces valeurs, on a effectué des mesures au spectrophotomètre avec une cuve de 1 cm de trajet optique :
DO340nm = 0,44
DO260nm = 1,31

Quelles sont les concentrations en NADH et NAD+ dans le mélange sachant que:
K NAD+ (à 340 nm) = 0 M-1cm-1
K NAD+ (à 260 nm) = 15 400 M-1cm-1


Réponses


Réponse à l'exercice 1 (Spectrophotometrie) Revenir à Exercice 1
- La relation entre l'absorbance ou densité optique (DO) d'une solution et sa concentration (c) est donnée par l'equation de Beer-Lambert :DO = Kcl, avec:
K = coefficient d'extinction molaire (unites : M-1 x cm-1)
c = concentration (unité : mol/l = M)
l = trajet optique (épaisseur de la cuve; unité : cm)
Selon les données, on aura:
0,70 = 1420 l mol-1 cm-1 x c x 1 cm
Donc: c = 5 x 10-4 M

- La DO d'une concentration en Lys égale à 0,35 mM:
Equation de Beer-Lambert: DO = Kcl
Ainsi : DO = 1420 l mol-1 cm-1 x (0,35 x 10-3M) x 1cm
DO = 0,50
Réponse à l'exercice 2 (Spectrophotometrie) - Revenir à Exercice 2
En exploitant la gamme-étalon, on trace la courbe (droite passant par l'origine) standard liant la DO à la concentration connue en hémoglobine. On obtient la droite suivante:

spectrophotometrie, absorbance

Comme la concentration inconnue a une absorbance de 0,45. La projection de cette valeur de DO sur la droite a pour vaeur de concentration en hémoglobine (axe des abscisses) 9,5 µg/ml.



Share this information on social media تبادل المعلومة عبر المواقع الإجتماعية
facebook Twitter Linkedin

Réponse à l'exercice 3 (Spectrophotometrie) - Revenir à Exercice 3
a- DO (à 340 nm) = 0,438, DO (à 260 nm) = 1,086.
b- (NADH) = 7,073. 10 -5 M, (NAD+) = 1,432. 10 -5 M



Spectrophotometrie (vidéo): Explication de l'absorbance ou Densité Optique (DO) des molécules et Suivi de la méthode de dosage par spectrophotometrie.

Ouvrages de la préparation de la transition Secondaire-Supérieur


sucres
Livre 'Structures et Métabolisme des sucres', M. Baaziz, 2018, 360 pages, 2018, ISBN : 978-9920-35-345-8 + DVD mis à jour + Assistance.
- Affiche
- Présentation du livre
livre 'Sciences de la vie. Protéines et Enzymes', Baaziz 2013, 306 pages, ISBN : 978-99-54-32-663-3
+ DVD mis à jour + Assistance
Sciences de la vie. Protéines et Enzymes

- livre 'Glossaire trilingue des sciences de la vie', Baaziz 2014 (+ DVD)

- من علوم الحياة إلى البيوكيمياء
Des Sciences de la vie au Lycée à la Biochimie à l'Université


- تحميل ملفات في مواضيع البيوكيمياء
Téléchargement de fichiers en Biochimie

Matériaux biochimiques


Actions takween pour la promotion de la culture scientifique et la réussite de la transition Lycée-Université
تكوين. دعم الثقافة العلمية و مواكبة الانتقال من الثانوية إلى الجامعة

Afin de pouvoir continuer à servir les visiteurs, soutenez nos actions sur le site takween en faisant acquisition des ouvrages et supports pédagogiques desitinés à améliorer l'enseignement et la recherche scientfique en Biochimie.

Livres biochimie, sciences vie

Adresse

Faculty of Sciences, Cadi Ayyad University
Marrakech, 40000, Morocco

CONTACTEZ NOUS

Email: baaziz@uca.ac.ma
Phone: 212524434649 (post 513)
Fax: 212524434669
About takween.com

spectrophotométrie. Exercices (امتصاصية الطيف)